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幼蚊细胞;C6/36说明书

2019/9/1 5:11:53发布162次查看
                          幼蚊细胞;c6/36说明书
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冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
幼蚊细胞;c6/36说明书细胞传代培养
一、原理   细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。   传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分   瓶。   
二、材料和试剂   1、细胞:贴壁细胞株   2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)   3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等  
三、操作步骤   1、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。   
2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。   
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。   观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。   
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。   附:消化液配制方法:   称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),加入100ml无ca2+、mg2+的hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。 

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